lunes, 15 de junio de 2015

                                         EXTRACCIÓN DE ADN


¿Qué es el ADN?

El ácido desoxirribonucleico (ADN) es una larga cadena doble enrollada en forma de hélice y constituida por una secuencia de unidades elementales llamadas nucleótidos. Un nucleótido está formado por :

-Un hidrato de carbono con 5 carbonos que recibe el nombre de desoxirribosa. 
-Una base nitrogenada. Esta puede ser de cuatro tipos: Adenina (A), Citosina (C), Guanina (G) y Timina (T).
-Ácido fosfórico.

estructura de los nucleótidos

Estructura ADN           

 La desoxirribosa y el ácido fosfórico se unen linealmente, formando dos largas cadenas que se enrollan en forma de hélice. Las base nitrogenadas se encuentran en el interior de la doble hélice.
Los nucleótidos están enfrentados en las dos cadenas de ADN por sus bases y forman una secuencia. Las bases son complementarias, ya que frente a Adenina siempre hay Timina y viceversa (A=T) y frente a Citosina siempre hay Guanina y viceversa (C=G).
El orden que adoptan la Adenina, Timina, Citosina y Guanina a lo largo de la cadena de ADN es lo que determina las instrucciones biológicas que establecen el color de ojos, de la piel, la altura... Una molécula de ADN consiste, pues, en dos secuencias muy largas de bases nitrogenadas complementarias representadas con las letras ACGT.

                                   

Tipos de ADN 


Autosómico nuclear: Está presente en los 22 pares de cromosomas que encontramos en todas las células del organismo, salvo en los gametos. La mitad de estos cromosomas se heredan de la madre y la otra mitad del padre.

- Cromosomas sexuales (XX,XY): El cromosoma X está presente en todas las personas y determina, junto con el Y, el sexo de los individuos, de modo que alguien será del sexo masculino si posee XY, y será del sexo femenino si posee dos cromosomas X. 
El cromosoma Y solo lo poseen los varones, quienes lo heredan de su padre. 

- Mitocondrial: Está contenido en las mitocondrias y la madre es la encargada de transmitirlo tanto a sus hijos como a sus hijas. Se conserva mejor que los otros tipos, por lo que se suele utilizar cuando se quiere analizar ADN en muestras muy antiguas y degradadas.


Proceso de análisis del ADN 

1. Extracción
2. Amplificación
3. Electroforesis
4. Comparación

1. Extracción

El ADN se puede obtener de cualquier célula que posea núcleo. Una gota de sangre, un trozo de hoja, o un pelo, aunque no tenga raíz, son suficientes. La extracción se realiza mediante la aplicación de diversas técnicas, en función de la calidad y cantidad de este. En cualquier caso, se añaden reactivos que rompen las membranas celulares y liberan el ADN contenido en las células, limpiándolo de restos no deseados como proteínas y otros compuestos orgánicos. 

2. Amplificación

Una vez seleccionados los fragmentos de ADN que interesan, a través de una técnica denominada Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), se multiplican los fragmentos escogidos, obteniendo millones de copias. 


3. Electroforesis 

Mediante una descarga eléctrica se separan los fragmentos que hemos amplificado y, con la ayuda de potentes equipos automatizados, se visualizan los resultados en forma de bandas o picos.



4. Comparación 

Se compara la secuencia obtenida en una determinada muestra con la de otra muestra de ADN y se observan las coincidencias para verificar si ambas secuencias pertenecen a la misma persona, corresponden a padre e hijo o no tiene ninguna relación. 



Aplicaciones 

El ADN continúa siendo objeto de estudio, y los resultados de la investigación se utilizan en muchas disciplinas. Entre las principales aplicaciones podemos hablar del Proyecto Genoma Humano, la Medicina Forense, las Bases de Datos Genéticas, la Ingeniería Genética y, dentro de esta última, la Terapia Génica y la Biotecnología. 


PRÁCTICA


Materiales : 



  • Un plátano                                   
  • 250 ml de agua destilada
  • Batidora
  • Sal de mesa     
  • Hielo                                 
  • Champú o lavavajillas
  • Cucharilla
  • Tubo de ensayo
  • Vaso para batir
  • Matraz
  • Alcohol etilico muy frío
  • Vaso de precipitados 
  • Pibeta Pasteur                   
  • Espátula 
  • Embudo para filtrar.                                  
  • Papel de filtro tipo cafetera .






Procedimiento :


1. Batir un plátano en 250 ml de agua destilada ( o mineral en su defecto, pero no del grifo) durante 15 a 20 segundos hasta obtener una papilla homogénea.


añadimos agua destilada...                   ...y se bate                                                                                    
 Al triturar el plátano , donde se rompen miltitud de células, obtenemos la papilla.                                                          

2. Por otra parte, en un vaso de precipitados pequeño se mezcla una cucharada de champú o lavavajillas (se rompen membranas)líquido con dos pizcas de sal de mesa. Después añadir 20 ml de agua destilada ala mezcla de champú y sal .




       
                                                                                   


3. Añadir ahora tres cucharaditas del puré de plátano a lo anterior y mezclar con la espátula durante 5 ó 10 minutos evitando formar espuma. Durante este tiempo se pueden preparar los tubos de ensayo como se describe en el siguiente punto y discutir la acción que desempeñan el lavavajillas y la sal.


 
4. Preparar en un tubo de ensayo con alcohol etilico por cada grupo y poner a enfriar lo máximo que sea posible, por ejemplo en baño de agua con hielo. Mejor aún si se ha mantenido refrigerado hasta el momento de realizar la práctica.
                                                                                          
     

Resultado de imagen de alcohol etilicoMientras, preparamos tubos con alcohol frío





5. Con los pasos anteriores hemos conseguido liberar el ADN en la disolución acuosa, la cual contendrá también diversos restos tisulares y celulares. Para eliminar estos restos dejamos filtrar la solución durante varios minutos en papel de filtro, filtro de cafetera o paño de algodón suave, hasta obtener unos 5 ml de filtrado.



        






6. Para precipitar el ADN separándolo de la disolución, se toma una parte del filtrado con una pipeta y se añade suavemente al tubo de ensayo que contiene alcohol muy frío. El filtrado, más denso que el alcohol y algo turbio, se deposita en el fondo del tubo. Deja reposat durante 2 ó 3 minutos sin moverlo en absoluto.






7. Veremos precipitar el ADN de color blanco en la interfase con el alcohol y ascender lentamente formando un grupo de aspecto algodonoso.

El ADN precipita  en forma de grumos algodonosos         y asciende hacia la parte superior del tubo


8. Podemos teñirlo añadiendo unas gotas de azul de metileno o verde de metilo al tubo.
Se puede extraer ADN del tubo recogiéndolo cuidadosamente con una varilla de vidrio o un instrumento similar que se hace girar lentamente.



Es fácil recoger ADN con el extremo de una pipeta PasteurEs fácil recoger ADN con el extremo de una pipeta PasteurEs fácil recoger ADN con el extremo de una pipeta Pasteur 
                                  



9. Ahora se pone un poco de ese ADN sobre un portaobjetos y se tiñe de azul de metileno durante 3 minutos. Se limpia el porta y se lleva al microscopio para su observación.


   10Otra posibilidad es conservar el ADN obtenido por uno de los siguientes métodos:

- En un frasco bien cerrado con alcohol etílico al 50% o 70%.
- Dejándolo secar al aire extendido sobre papel de filtro.


OBJETIVO :

 En esta práctica realizamos la extracción del ADN de las células de pulpa de plátano poniendo de manifesto se estructura fibrial y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el empaquetamiento en el núcleo celular de larguísimas cadenas de esta molécula




lunes, 1 de junio de 2015

CROMATOGRAFÍA POR CAPILARIDAD EN PAPEL DE FILTRO

ESPINACAS

Un mito muy extendido sobre las espinacas es que son muy ricas en hierro. De hecho, se hizo una serie para fomentar su consumo.
El origen de esta equivocación está en un error del científico E. Von Wolf (1870), que multiplicó por 10 la cantidad de hierro al errar en la colocación de una coma.3 4 5 Hoy día se sabe que en general las otras plantas comestibles contienen niveles de hierro similares o incluso superiores a la espinaca, como es el perejil, semillas de sésamo, acelgas, berza, col, y en general la mayoría de verduras de hoja verde oscura.
De todos modos, aunque tengan poco hierro (los garbanzos y las lentejas tienen más) y éste no sea fácilmente asimilable, las espinacas siguen siendo un alimento muy aconsejable. Es rica en vitaminas A y E, yodo y varios antioxidantes. Por su relativamente elevado contenido en ácido oxálico, debe consumirse con moderación.


ENFERMEDADES
El hongo Peronospora effusa produce el mildiu de la espinaca que se caracteriza por unas manchas amarillas en la hojas, y en el envés una capa de color grisáceo.


PIGMENTOS VEGETALES

Los pigmentos son compuestos en las plantas que dan color.
 Absorben ciertos espectros de luz y reflejan otros. Por ejemplo, la clorofila refleja la luz verde. Un reflejo particularmente intenso aumentará el color de la planta. Los pigmentos de la espinaca sirven a una variedad de funciones, tanto para la planta como para quienes la consumen.




Las hojas de espinaca contienen clorofila, carotenoides y otros pigmentos.


Clorofila

La clorofila es el pigmento verde en la mayoría de las plantas que está asociado con la fotosíntesis. El pigmento absorbe toda la luz de color a excepción de la banda verde, que se refleja para dar a la espinaca su color de hoja y tallo característico. "La clorofila a" es de un fuerte color verde azulado y es responsable principalmente de la fotosíntesis, mientras que "la clorofila b" es un pigmento fotosintético de apoyo, de acuerdo con la Universidad de Química de Wisconsin.



Carotenoides


Los carotenoides son especialmente útiles para los humanos, ya que se descomponen en el cuerpo para convertirse en vitamina A, un nutriente esencial para la salud y la supervivencia. Por lo general son los pigmentos de color amarillo anaranjado que dan a las zanahorias su color característico. El beta caroteno es el pigmento carotenoide principal que se encuentra en las espinacas.



ÉTER DE PETRÓLEO

El éter de petroleo es la fracción volátil que destila entre los 20 y los 60°C y contiene principalmente pentanos y hexanos.
Es un líquido incoloro con olor a gasolina.
Es una mezcla líquida de diversos compuestos volátiles, muy inflamables, de la serie homóloga de los hidrocarburos saturados o alcanos, y no a la serie de los éteres como erróneamente indica su nombre. Se emplea principalmente como disolvente no polar.
El éter de petróleo se obtiene en las refinerías de petróleo como una parte del destilado, intermedia entre la nafta ligera y la más pesada del queroseno.1 Tiene una densidad relativa comprendida entre 0,6 y 0,8, en función de su composición. Las siguientes fracciones de destilación del éter de petróleo están comúnmente disponibles como productos comerciales, en función de su temperatura de ebullición: 30 a 40 ° C, 40 a 60 ° C, 60 a 80 ° C, de 80 a 100 ° C, de 80 a 120 ° C y, a veces 100 a 120 ° C. La fracción 60 a 80 ° C se utiliza a menudo como sustituto del hexano. El éter de petróleo es utilizado principalmente por las compañías farmacéuticas en el proceso de fabricación de fármacos. Éter de petróleo se compone principalmente de pentano, y se utiliza a veces en su lugar, debido a su menor costo. El éter de petróleo, no es técnicamente un éter sino un alcano.2



ALCOHOL

Se denomina alcohol (‘toda sustancia pulverizada’, ‘líquido destilado’) a aquellos compuestos químicos orgánicos que contienen un grupo hidroxilo(-OH) en sustitución de un átomo de hidrógeno, enlazado de forma covalente a un átomo de carbono. Además este carbono debe estar saturado, es decir, debe tener solo enlaces simples a sendos átomos, esto diferencía a los alcoholes de los fenoles.
Si contienen varios grupos hidroxilos se denominan polialcoholes. Los alcoholes pueden ser primarios, secundarios o terciarios, en función del número de átomos de hidrógeno sustituidos en el átomo de carbono al que se encuentran enlazado el grupo hidroxilo.



EXTRACCIÓN DE LA CLOROFILA Y DE LOS PIGMENTOS DE TINTA 
Ingredientes:
  • Hojas de espinacas
  • 10 cm3 de éter de petróleo
  • 2 cm3 de alcohol etílico
  • Rotuladores de color
  • Papel de filtro

Procedimiento: 


1. Se machacan las hojas de espinaca. 

2. Se le añade el éter de petróleo y el alcohol etílico y se sigue machacando. 

3. La mezcla se vierte en una placa de petri pequeña y se coloca papel de filtro en forma de hoja doblada


















En otra placa de petri pequeña se vierte alcohol etílico y el éter de petróleo y se coloca igualmente papel de filtro doblado con una franja coloreada de un color secundario. 

4. La primera mezcla (hojas de espinacas) asciende por capilaridad y dará tres bandas de color distintas de abajo a arriba: clorofila A, clorofila B y xantofila naranja. 

En la segunda mezcla (rotuladores) podremos observar los diferentes pigmentos de los que está hecho el color secundario.